选对转染前后以及配制转染复合物时使用的培养基对于细胞实验的成功也十分关键。主要是培养基中的血清以及抗生素的存在与否对siRNA转染实验的影响。
1、培养基中的血清对转染实验的影响
血清中主要含有蛋白质、生长因子、激素和其他支持细胞生长、附着和体外存活的成分。虽然它是细胞生长必需的要素,但是对于转染实验来说,血清并不是那么友好,何时使用、怎么使用都非常重要。
·在转染前即铺板时和转染后建议使用只含血清不含抗生素的培养基,Starvio siRNA转染试剂不同于一般的脂质体转染试剂,它对细胞的毒性很低,血清的存在不会影响转染效果,并且转染后不需要换液,操作更加简便;而脂质体转染试剂本身毒性就大,在转染过程中如果含血清,还会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,从而导致细胞死亡、转染效率降低,所以要求在转染前换无血清培养基,转染后4-6h再更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。如果实验者没有好用的培养基,推荐使用DMEM源培L110KJ培养基或者RPMI-1640普诺赛PM150110培养基,这两款产品与Starvio siRNA转染试剂都有较好的适配性。
·另外,在配制转染复合物的时候,若含有血清,血清中的蛋白会与转染试剂或者siRNA结合从而干扰转染试剂与siRNA复合物的形成,最终影响转染效率。因此,在配制转染复合物时,建议使用星启百代专研的转染增强剂,不仅可以完全替代无血清培养基,而且与Starvio siRNA转染试剂整体搭配进行实验,转染效率更高。
2、培养基中的抗生素对转染实验的影响
抗生素本身对细胞的生长并不是必须的,但是在细胞培养过程中,往往存在支原体、细菌、真菌等污染,添加抗生素可以很好的防止污染。与这种积极作用不同的是,如果在转染实验中,添加了抗生素如常用的青霉素、链霉素,很可能致使细胞活性下降、转染效率低下。原因是在进行转染时,转染试剂增加了细胞的通透性,这些抗生素一般情况下确实对于真核细胞无毒,但在细胞通透性增加后,抗生素也会随之进入细胞,继而损伤细胞。因此,整个siRNA转染实验过程即从接种细胞开始就要避免使用抗生素。